گزارشات بیشماری در زمینه نجات جنین های هیبرید ارائه گردیده است. از آنجا که بدست آوردن جنین های هیبرید برای کلاس های عملی، کار مشکلی است، می توان جنین های نابالغ را از گیاه مورد نظر جداسازی نمود. راهکار مشابهی را می توان برای نجات جنین هیبرید، در زمانیکه چنین تلاقی هایی صورت می گیرد، بکار گرفت.
مراحل کشت جنین غلاتی نظیر گندم، جو، ذرت، برنج:
١- اندام باردهی گیاه از جمله بلال در ذرت، پانیکول در برنج و سنبله مرکب در گندم و جو را پس از گذشت ۱۴-۱۲ روز از زمان تلاقی یا گرده افشانی، زمانیکه بذرهای در حال نمو در مرحله شیری هستند، جدا نمایید. قطر جنین در این مرحله، حدود ۱/۵ میلی متر است.
۲- اندازه جنین را در زیر بینوکولار مورد بررسی قرار دهید. به کمک گیره و یا سوزن، بذرها را از بلال، پانیکول و یا سنبله جدا نموده و پوشینه و پوشینک را در صورت وجود، حذف نمایید
۳- چند عدد از این بذرها را در یک بشر ریخته و با محلول ۲۰٪ هیپوکلریت سدیم تجارتی به مدت ۱۰ دقیقه ضدعفونی نمایید. این اعمال بایستی در زیر هود لامینار ایرفلو انجام شود. سپس بذرها را ۳ الی ۵ مرتبه با آب مقطر استریل شستشو دهید.
۴- هر بذر استریل شده را بر روی یک سطح استریل یا در کف پتری استریل قرار داده و در حالیکه بذر را با یک سوزن ثابت نگه داشته اید، با سوزن دیگری در بافت آندوسپرم ناحیه فوقانی جنین، شکافی ایجاد نمایید
۵- در اتاقک هود لامینار ایرفلو با استفاده از میکروسکوپ تشریح، جنین های نارس را که ۱/۵-۱ میلیمتر قطر دارند، از بذرها بیرون آورید.
۶- به منظور تشکیل گیاه بطور مستقیم، جنین ها را در سطح محیط کشت MS یا B5 فاقد مواد تنظیم کننده رشد قرار دهید.
۷- کشت ها را در روشنایی و دمای ۲۵ درجه سانتیگراد در انکوباتور قرار دهید.
۸- پس از ۲ هفته، گیاهچه ها را به محیط کشت MS یا B5 نیمه غلظت با محتوی ساکارز تقلیل یافته (۱٪) منتقل کنید.
-
شکل گیری گیاه کامل
۸- گیاهچه ها را به گلدان های پلاستیکی محتوی خاک استریل انتقال دهید. خاک گلدان بایستی حتما مرطوب باشد. پس از انتقال گیاهچه به خاک، روی آن را با یک بشر به صورت واژگون و یا ایجاد خیمه ای از جنس پلاستیک بپوشانید. از لیوان های پلاستیکی شفاف یکبار مصرف استفاده کنید. این گیاهچه در طی چند روز اول نیاز به آب ندارد.
۹- ظروف را تحت تابش نور قرار دهید. هر روز به مدت چند دقیقه با باز کردن خیمه پلاستیکی و یا برداشتن بشر، اجازه دهید تبادل هوا صورت بگیرد. پس از گذشت یک هفته این مدت زمان را به یک ساعت در روز و در هفته بعد تدریجا به چند ساعت در روز افزایش دهید. پس از ۳-۲ هفته پوشش روی گیاه را کلا بردارید تا گیاه خود را با شرایط محیطی وفق دهد.
منبع: کتاب اصول بیوتکنولوژی گیاهی، انتشارات دانشگاه فردوسی مشهد، چاپ ششم.
دیدگاهتان را بنویسید