تاریخ :۱۰ فروردین ۱۴۰۳
انگشت-نگاری-DNA

تکنیک انگشت نگاری DNA و کاربردهای آن

  • تکنیک انگشت نگاری DNA و کاربردهای آن

    در این مقاله از دی مگ تکنیک انگشت نگاری DNA و کاربردهای آن در ژنوتیپ گیاهی و نقشه برداری ژنوم را شرح می دهیم. یک استراتژی جدید برای تشخیص تفاوت‌های ژنتیکی بین ارگانیسم‌ها، تکنیک انگشت نگاری DNA (DAF) است که از یک DNA پلیمراز مقاوم در برابر حرارت استفاده می‌کند که معمولاً توسط یک آغازگر اولیگونوکلئوتیدی کوتاه (≥۵ جفت باز) با توالی دلخواه هدایت می‌شود. تا بخش‌های کوتاه DNA ژنومی را تکثیر کند و طیف وسیعی از محصولات قابل گسترش DNA را تولید کند.

    این محصولات را می توان با الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید و رنگ آمیزی نقره آنالیز کرد. تکنیک انگشت نگاری DNA سریع و حساس است و مستقل از شبیه سازی و خصوصیات ژنتیکی قبلی است. 

    انگشت نگاری DNA (DNA Amplification Fingerprinting)

    این نشانگرها از نظر مبانی و اصول هیچ تفاوتی با نشانگرهای RAPD ندارند. فقط چند تفاوت جزیی از نظر تکنیکی آنها را از RAPD متمایز می کند. در این روش نیز مانند RAPD از یک آغازگر استفاده می شود، ولی طول آغازگر گاهی خیلی کوتاه است (۶ تا ۸ نوکلئوتید). همچنین دمای اتصال آغازگرها به DNA الگو در RAPD معمولاً تا ۳۶ درجه و در تکنیک انگشت نگاری DNA، سی درجه سانتیگراد تعیین می گردد.

    تکنیک انگشت نگاری DNA و کاربردهای آن

    تکنیک انگشت نگاری DNA و کاربردهای آن

    تفاوت روش RAPD و انگشت نگاری DNA

    به طور کلی تفاوت های عمده این دو روش عبارت اند از:

    ۱- در روش انگشت نگاری DNA، از آغازگرهای اختیاری ۵ تا ۸ نوکلئوتیدی استفاده می شود و در مقایسه با RAPD الگوی باندی پیچیده تری ایجاد می کند.

    ۲- به دلیل کوتاه تر بودن آغازگرها در روش انگشت نگاری DNA درجه حرارت مرحله اتصال آن کمتر از نشانگر RAPD است.

    ۳– تفاوت دیگر این دو نوع نشانگر در روش تفکیک قطعه های تکثیر شده است. به طوری که در انگشت نگاری DNA از الکتروفورز ژل پلی اکریلامید و رنگ آمیزی نقره و در RAPD از رنگ آمیزی اتیدیوم بروماید استفاده می شود.

    ۴- در تکنیک انگشت نگاری DNA غلظت آغازگر را بیشتر در نظر می گیرند.

    جشنواره پاییزه
    جشنواره فروش بذر های خاص و کمیاب با بیش از ۱۲۰۰ رقم تنوع
    همین الآن خرید کنید

    ۵- چرخه PCR در تکنیک انگشت نگاری DNA از دو قطعه حرارتی و در RAPD از سه قطعه حرارتی تشکیل شده است.

    کاربرد روش انگشت نگاری DNA

    از روش انگشت نگاری DNA (DAF) می توان برای انگشت نگاری تعداد زیادی از موجودات با هر نوع پیچیدگی ژنوم استفاده کرد. گاهی در روش انگشت نگاری DNA به منظور افزایش چند شکلی، آغازگرها به صورت جفتی مورد استفاده قرار می گیرند که در این حالت به آن DAF چند تایی می گویند.

    کاربرد تکنیک انگشت نگاری DNA

    کاربرد تکنیک انگشت نگاری DNA

    همچنین این مورد در حالتی که تعداد کمی آغازگر در اختیار باشد مفید خواهد بود. برای مثال اگر فقط ۱۰ آغازگر الیگونوکلئوتیدی در اختیار باشد با ترکیب جفتی آغازگرها امکان بررسی ۹۰ ترکیب وجود خواهد داشت.

    مزایا و معایب

    تقریبا مشابه نشانگرهای RAPD است، به جز اینکه نشانگرهای DAF به دلیل کاربرد ژل پلی آکریلامید و جداسازی بهتر، باندها قدری قابل اعتمادترند. همچنین استفاده از پرایمر طولانی و دوگانه در PCR مستلزم آن است که دانش قبلی از توالی هدف وجود داشته باشد. اما چنین الزامی برای تکنیک انگشت نگاری DNA وجود ندارد.

    منبع: کتاب نشانگرهای مولکولی، انتشارات دانشگاه تهران.

    امتیاز شما به این مقاله چقدره؟

    میانگین امتیازات ۵ از ۵

    اشتراک‌گذاری

    دیدگاهتان را بنویسید

    نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *