مواد گیاهی:
- هیپوکوتیل گیاهچه های هویج
روش کار:
۱- مقداری آب به درون یک ارلن ریخته و چند قطره مایع شوینده به آن بیافزائید. سپس بذرها را در این محلول انداخته و تکان دهید تا شسته شوند. همچنین می توانید آنها را در دو لایه از پارچه های توری نخی یا پلاستیکی قرار داده و با آب بشویید.
۲- بذرها را در الکل ۷۰٪ به مدت ۶۰-۳۰ ثانیه فرو ببرید.
۳- بذرها را به یک بشر و یا ارلن محتوی محلول ۴۰-۲۰٪ هیپوکلریت سدیم تجارتی به مدت ۱۵ – ۲۰ دقیقه منتقل نموده و سپس ۵-۳ مرتبه با آب مقطر استریل بشویید.
۴- دو تا سه بذر را در هر ظرف کشت در سطح محیط کشت جامد MS قرار دهید.
۵- کشت ها را به مدت یک تا دو هفته در دمای ۲۵°C، تحت فتوپریود ۱۶ ساعت، با شدت نوری ۱۰۰۰ لوکس قرار دهید.
۶- گیاهچه های جوانه زده را زمانیکه کوتیلدون ها به خوبی توسعه یافته اند، جمع آوری کنید.
۷- قطعات هیپوکوتیل را به محیط کشت MS + ۱ – ۲ mg/1 2,4–D منتقل نمایید.
۸- کشت ها را به مدت ۸-۴ هفته در تاریکی و دمای ۲۵ درجه سانتیگراد قرار دهید.
۹- هر ۴-۳ هفته یکبار، قطعات کوچکی از بافت کالوس را به محیط کشت تازه انتقال دهید و به این ترتیب بافت کالوس را حفظ کنید. بافت کالوس دارای سلول های مولد پیش جنین و جنین های میکروسکوپی که در مراحل ابتدایی نمو قرار دارند، می باشد.
۱۰- قطعاتی به اندازه ۱-۰/۵ سانتی متر از بافت کالوس را در محیط کشت جامد MS فاقد هورمون، کشت داده و کشت را در دمای ۲۵ درجه سانتیگراد تحت فتوپریود ۱۶ ساعت با شدت نوری ۱۰۰۰ لوکس در انکوباتور بگذارید. طی ۳-۲ هفته، جنین ها و گیاهچه های سبز رنگی در محیط کشت ظاهر خواهند شد.
شکل گیری گیاه کامل
۱۱- گیاهچه ها را به طور انفرادی و یا گروهی از بافت کالوس جدا کرده و در محیط کشت MS نیمه غلظت (Half strength) کشت دهید. این کشت ها را تحت فتوپریود ۱۶ ساعت و شدت نوری ۵ کیلولوکس در انکوباتور قرار دهید. پس از ۵-۴ هفته، گیاهچه های هویج در محیط کشت نمایان خواهند شد.
۱۲- هر گیاهچه را به گلدان کوچک محتوی پیت خزه (پیت موس) و ورمی کولیت استریل به نسبت ۱:۱ انتقال دهید، و روی آن را با یک ظرف پلاستیکی بپوشانید، که رطوبت بالا در اطراف آنها حفظ شود.
۱۳- ظروف را تحت تابش نور قرار دهید. هر روز به مدت چند دقیقه با باز کردن خیمه پلاستیکی و یا برداشتن بشر، اجازه دهید تبادل هوا صورت بگیرد. پس از گذشت یک هفته این مدت زمان را به یک ساعت در روز و در هفته بعد تدریجا به چند ساعت در روز افزایش دهید. پس از ۳-۲ هفته پوشش روی گیاه را کلا بردارید تا گیاه خود را با شرایط محیطی وفق دهد.
منبع: کتاب اصول بیوتکنولوژی گیاهی، انتشارات دانشگاه فردوسی مشهد، چاپ ششم.
دیدگاهتان را بنویسید