القاء کالوس در غلات

مراحل القاء کالوس در غلاتی چون گندم، برنج، ذرت، جو:

• کشت بذر

١- اندام باردهی گیاهانی چون بلال در ذرت، پانیکول در برنج و سنبله مرکب در گندم و جو را پس از گذشت ۱۴-۱۲ روز از زمان تلاقی یا گرده افشانی، زمانیکه بذرهای در حال نمو در مرحله شیری هستند، جدا نمایید.

۲- قطر جنین در این مرحله، حدود ۱/۵ میلی متر است. اندازه جنین را در زیر بینوکولار مورد بررسی قرار دهید. به کمک گیره و یا سوزن، بذرها را از بلال، پانیکول و یا سنبله جدا نموده و پوشینه و پوشینک را در صورت وجود، حذف نمایید

۳- چند عدد از این بذرها را در یک بشر ریخته و با محلول ۲۰٪ هیپوکلریت سدیم تجارتی به مدت ۱۰ دقیقه ضدعفونی نمایید. این اعمال بایستی در زیر هود لامینار ایرفلو انجام شود. سپس بذرها را ۳ الی ۵ مرتبه با آب مقطر استریل شستشو دهید.

۴- هر بذر استریل شده را بر روی یک سطح استریل یا در کف پتری استریل قرار داده و در حالیکه بذر را با یک سوزن ثابت نگه داشته اید، با سوزن دیگری در بافت آندوسپرم ناحیه فوقانی جنین، شکافی ایجاد نمایید.

۵- در اتاقک هود لامینار ایرفلو با استفاده از میکروسکوپ تشریح، جنین های نارس را که ۱/۵-۱ میلیمتر قطر دارند، از بذرها بیرون آورید.

• القاء بافت کالوس

۶- برای القاء بافت کالوس، ۵ تا ۶ عدد جنین را به نحویکه ناحیه اسکوتلوم آنها (بافت جایگزین آندوسپرم در غلات) به سمت بالا باشد، در یک ظرف کشت بر روی محیط کشت MS + 2 mg/l 2,4 – D قرار دهید.

جشنواره پاییزه

جشنواره فروش بذر های خاص و کمیاب با بیش از ۱۲۰۰ رقم تنوع

همین الآن خرید کنید

۶- کشت ها را در تاریکی و دمای ۲۵ درجه سانتیگراد در انکوباتور قرار دهید. جنین ها در ابتدا متورم شده و سپس در طی ۴-۳ هفته، بافت کالوس از اسکوتلوم تولید می شود (جنین هایی که قطر آنها بیش از ۲ میلی متر باشد، به طور نا به هنگام به گیاه تبدیل می شوند).

۷- اگر کالوس منشأ گرفته از بافت اسکوتلوم را ۶-۴ هفته پس از تولید به ۳-۲ قطعه تقسیم نموده و به محیط کشت مشابهی انتقال دهید، این قدرت را دارد که حداقل یک بار تکثیر شود.

۸- قطعات سفت و متراکم کالوس را به اندازه ۰/۵ سانتیمتر مربع برش داده و برای تکثیر به محیط کشت مشابهی انتقال دهید.

منبع:  کتاب اصول بیوتکنولوژی گیاهی، انتشارات دانشگاه فردوسی مشهد، چاپ ششم.

رسول رحیم پور