آلودگی های PCR
در خصوص مبحث آلودگی های PCR، باید گفت که سنجش های DNA پلیمراز و PCR بسیار مستعد آلودگی هستند. با توجه به اینکه PCR در بسیاری از کاربردهای تشخیصی بالینی با چندین نمونه بیمار در یک صفحه استفاده می شود، می توان آلودگی را از طریق هزاران و میلیون ها نسخه توالی DNA منتقل کرد. اگر عامل آلوده کننده در اوایل واکنش معرفی شود، به صورت نمایی تکثیر می شود که منجر به نتایج نادرست یا کاذب می شود.
منابع ایجاد آلودگی PCR
- دستگاه الکتروفورز،
- لوله های سانتریفیوژ،
- وارد کردن نوک سمپلر به ژل،
- ترموسایکلر،
- بلوک های حرارتی،
- روش های جمع آوری نمونه،
- آب یا سیستم خنک کننده،
- محیط آزمایشگاه،
- پرسنل آزمایشگاه
- و دستگاه هموژنیزه کننده بافت.
- اما شایع ترین علل آلودگی در PCR عبارتند از:
۱- تنظیم نادرست دستگاه های آزمایشگاه و گردش کار نامناسب
۲- آلودگی پرسنل آزمایشگاه
۳- عدم جداسازی نمونه
۴- استریلاسیون نامناسب تجهیزات آزمایشگاهی
تنظیم آزمایشگاه برای گردش کار بهینه PCR
ایجاد یک محیط آزمایشگاهی مناسب و ایجاد گردش کار یک طرفه، دو روش برای جلوگیری از آلودگی PCR است. برای اطمینان از کنترل مناسب، پرسنل آزمایشگاه بایستی تضمین کیفیت یک پروتکل استاندارد و مستند به اندازه فضای آزمایشگاه و تجهیزات موجود را ایجاد می کنند. پرسنل باید به دقت آموزش ببینندو از دسترسی به رویه های کتبی برخوردار باشند. این گردش کار یکطرفه شامل ۵ روش زیر است:
- برای هر مرحله واکنش PCR مناطق کار یا اتاق های جداگانه ایجاد کنید.
- هرگز لوله های آزمایش قبلاً استفاده شده در PCR را به اتاق کار بعدی برنگردانید.
- مستر میکس باید در وسل واکنش تهیه و تقسیم شود و به یک منطقه مجاور و تفکیک شده منتقل شود.
- الگوی DNA هرگز نباید در ناحیه ای که مسترمیکس تهیه می شود، وجود داشته باشد.
- لوله های واکنش حاصل از تکثیرهای قبلی هرگز نباید با نمونه های تکثیر نشده یا معرف های استفاده نشده، نگهداری شوند.
در حالی که آزمایشگاه های بزرگ این امکانات را دارند که برای هر واکنش PCR اتاق جداگانه ایجاد کنند. آزمایشگاه های کوچک از هودهای PCR یا هودهای بدون دمنده هوا برای ایجاد جداسازی مورد نیاز برای جلوگیری از آلودگی استفاده می کنند.
هودهای PCR و لامپ UV
هودهای PCR می توانند به یک لامپ UV ضد میکروبی مجهز شوند. که در فواصل زمانی مشخص برای استریل سازی محیط کار استفاده شوند. قرار گرفتن در معرض اشعه ماورا بنفش می تواند مضر باشد. بنابراین باید در حالی که لامپ ماورا بنفش مشغول است، از اتاق خارج شوید. اگرچه این امکان وجود ندارد، پرسنل آزمایشگاه باید همیشه هنگام کار در زیر این لامپ ها از تجهیزات محافظتی مناسب استفاده کنند. مهم است که هودهای مجهز به لامپ UV از مواد مناسب در برابر اشعه ماورا UV بنفش ساخته شده باشند.
- واکنش های PCR باید در یک هود واکنش PCR جداگانه انجام شود
- کل سطح کارکرد هود و همچنین پیپت ها باید با سفید کننده با رقت ۱:۱۰ یا ۱:۲۰ شستشو و سپس با اتانول ۷۰٪ استریل شوند.
- هر هود واکنش PCR باید شامل تجهیزات اختصاصی شامل پیپت، سانتریفیوژ و ظروف پلاستیکی باشد و نباید به هود دیگری منتقل شوند.
پیپت های توصیه شده در هودهای PCR
برای جلوگیری از انتقال آلودگی از یک نمونه به نمونه دیگر، پیپت هایی که پلاستیکی هستند و برای جلوگیری از آلودگی و مواد فرار یا چسبناک با حجم های کم مانند DNA کاربرد دارند، انتخاب کنید. این پیپت ها نه تنها دقت بیشتری را ارائه می دهند، بلکه در مقایسه با میکروپیپت های جابجایی هوا، از نمونه برتر نیز محافظت می کنند.
با پیروی از بهترین روش های پایه ای آزمایشگاه و برخی از تکنیک های اختصاصی PCR، می توان آلودگی در واکنش های PCR را کنترل کرد. در حالت ایده آل، تجهیزات آزمایشگاهی مورد استفاده برای مطالعه مواد ژنتیکی نباید برای آزمایش های دیگر مورد استفاده قرار گیرند. حتی با داشتن پروتکل مناسب، احتمال آلودگی متقابل وجود دارد. با پیروی از پروتکل مستند و دقیق، کارایی و دقت را بهبود ببخشید.
منبع: www.laboratory-equipment.com
دیدگاهتان را بنویسید