روش الکتروفیوژن:
پروتوپلاست ها در یک ظرف کشت کوچک که دارای دو الکترود می باشد قرار داده می شوند. سپس یک اختلاف پتانسیل الکتریکی برقرار می گردد که باعث می شود پروتوپلاست ها به صورت ردیفی در حد فاصل الکترودها قرار گیرند. در این حالت اگر یک شوک الکتریکی موج کوتاه، به شدت اعمال گردد، پروتوپلاست ها را تحریک به امتزاج می نماید.
این روش امتزاج، از دو مرحله تشکیل یافته است:
مرحله اول:
که با اعمال یک جریان الکتریکی متناوب کم شدت بر سوسپانسیون پروتوپلاستی شروع می شود. هنگامی که هدایت الکتریکی محیط کشت سوسپانسیونی کمتر از sec/cm ۱۰۵ باشد و جریان متناوبی با پتانسیل ۱/۵ ولت و فرکانس مگاهرتز (MHZ) برقرار گردد، در اثر جریان الکتروفورزی حاصل، سلول ها در طول خطوط میدان الکتریکی به یکدیگر می چسبند.
مرحله دوم:
در مرحله دوم، یک جریان الکتریکی مستقیم با شدتی معادل V/ cm ۷۵۰ – ۱۰۰۰ در مدت زمان ۵۰-۲۰ میکرو ثانیه در مدار برقرار می گردد که برقراری این جریان موجب شکستن غشاء پلاسمایی سلولها در ناحیه اتصال آنها به یکدیگر می شود. پس از شکستن غشاء پلاسمایی در ناحیه اتصال، دو سلول با یکدیگر امتزاج می یابند و غشاء پلاسمایی مجددا شکل می گیرد.
تکنیک الکتروفیوژن، ساده و سریع است و بازده بالایی دارد. سلول ها پس از الکتروفیوژن سمیت نشان نمی دهند. با این وجود، این تکنیک به دلیل نیاز به تجهیزات خاص از مقبولیت چندانی برخوردار نگردیده است.
منبع: کتاب اصول بیوتکنولوژی گیاهی، انتشارات دانشگاه فردوسی مشهد، چاپ ششم.
دیدگاهتان را بنویسید