مراحل کشت جنین در حبوبات نظیر نخود سبز، نخود سیاه، لوبیای فرانسوی، سویا:
۱- غلاف های در حال نمو را که جنین های آنها در مرحله قلبی شکل و مرحله شروع کوتیلدون می باشد، جدا نمایید. بسته به گونه گیاه، این مرحله تقریبا ۱۲-۹ روز پس از گرده افشانی خواهد بود.
ا- غلاف را در الکل ۷۰٪ به مدت ۱ دقیقه فرو برده و سپس با محلول ۲۰٪ هیپوکلریت سدیم تجارتی به مدت ۱۰ دقیقه استریل نمایید. این اعمال بایستی در زیر هود لامینار ایرفلو انجام شوند. در نهایت غلاف ها را ۵-۳ مرتبه با آب مقطر استریل شستشو دهید.
۳- غلاف ها را بر روی یک سطح استریل یا در کف پتری استریل شده قرار داده و پس از باز نمودن غلاف، به آرامی بذور در حال نمو را بر روی یک لام یا پتری دیش منتقل نمایید.
۴- بخشی از پوشش بذر را که دقیقا در بالای جنین قرار دارد، حذف نموده و جنین را توسط گیره و سوزن با دقت خارج نمایید.
۵- جنین را در محیط کشتی با فرمول زیر قرار دهید:
MS + Casein hydrolysate (200 mg/l) + L-glutamine (100-200 mg/l) + NAA (0.01 µM)+BAP (1.0 MM) + Sucrose (3-8%).
۶- کشت ها را در روشنایی و دمای ۲۵ درجه سانتیگراد در انکوباتور قرار دهید.
مراحل شکل گیری گیاه کامل
۱- پس از ۳ الی ۴ هفته، گیاهچه ها را به محیط کشت MS نیمه غلظت با ساکارز تقلیل یافته (۱٪) و فاقد مواد تنظیم کننده رشد، منتقل نمایید.
۲- گیاهچه ها را به گلدان های پلاستیکی حاوی خاک استریل منتقل نموده و خاک گلدان بایستی حتما مرطوب باشد. پس از انتقال گیاهچه به خاک، روی آن را با یک بشر به صورت واژگون و یا ایجاد خیمه ای از جنس پلاستیک بپوشانید. از لیوان های پلاستیکی شفاف یکبار مصرف استفاده کنید. این گیاهچه در طی چند روز اول نیاز به آب ندارد.
۳- ظروف را تحت تابش نور قرار دهید. هر روز به مدت چند دقیقه با باز کردن خیمه پلاستیکی و یا برداشتن بشر، اجازه دهید تبادل هوا صورت بگیرد. پس از گذشت یک هفته این مدت زمان را به یک ساعت در روز و در هفته بعد تدریجا به چند ساعت در روز افزایش دهید. پس از ۲ الی ۳ هفته پوشش روی گیاه را کلا بردارید تا گیاه خود را با شرایط محیطی وفق دهد.
منبع: کتاب اصول بیوتکنولوژی گیاهی، انتشارات دانشگاه فردوسی مشهد، چاپ ششم.
