ماده گیاهی:
-
غده سیب زمینی
روش کار:
۱- به منظور شکستن خواب جوانه ها، غده های سیب زمینی را در محلول اسید جیبرلیک (GA3) ۰/۳ مولار به مدت ۱ ساعت بخیسانید و یا آنها را به مدت دو روز در دمای اتاق قرار دهید.
۲- غده ها را با آب معمولی بشوئید و به مدت ۲۰-۱۰ دقیقه در محلول تجارتی هیپوکلریت سدیم ۱۰ فرو ببرید، تا ضدعفونی سطحی شوند.
۳- غده های سالم و یا قطعاتی به اندازه ۳-۲ سانتی متر مربع و وزن ۳۰-۲۰ گرم از آنها را ابر سطح ورمی کولیت استریل مرطوب در اتاقک رشد قرار دهید.
۴- جوانه ها را پس از اینکه ۵-۲ سانتیمتر رشد طولی نمودند، جدا نمایید.
-
تولید گیاهچه های این ویترو از مواد گیاهی
۱- گره های سوم و چهارم از سمت نوک ساقه را با استفاده از اسکالپل به صورت قطعاتی به طول ۱-۲ سانتی متر برش داده و برگها را حذف نمایید.
۲- قطعات را با خیساندن در محلول ۱۰٪ هیپوکلریت سدیم تجارتی به مدت ۱۰ دقیقه استریل نموده و پس از ۳ بار شستشو با آب مقطر استریل، دوباره قاعده آنها را با اسکالپل بیرید.
۳- جوانه ها یا قطعات گره را بر سطح محیط کشت MS کشت نمایید.
۴- اجازه دهید تا ساقه حاصل تا مرحله ۶-۴ گره ای رشد نماید.
-
تکثیر با استفاده از قطعه گره ای
۱- یک گیاهچه را با استفاده از گیره استریل از ظرف کشت بردارید و به سطح یک کاغذ صافی و یا پتری دیش استریل منتقل کنید. این عمل بایستی در زیر هود لامینار ایرفلو صورت گیرد
۲- ساقه اصلی را با ایجاد برش هایی در بخش فوقانی و تحتانی هر گره به قطعاتی بطول ۱ – ۲ سانتی متر برش دهید و هر گره را در یک ظرف کشت محتوی محیط کشت MS قرار دهید.
-
تکثیر با استفاده از مریستم
۱- قطعات گره ای سوم و چهارم را از گیاهانی که در شرایط این ویترو پرورش یافته اند، جدا نمایید.
۲- در زیر هود استریل و با استفاده از یک میکروسکوپ تشریح با بزرگنمایی ۲۵-۱۰ برابر، برگ های محافظ جوانه را حذف کنید.
۳- قبه مریستمی را به همراه یکی از آغازین های برگ تحتانی آن به طول تقریبی ۰/۵ میلی متر خارج نمایید.
۴- قبه مریستمی را در سطح محیط کشت MS به همراه KIN با غلظت ۰/۴۶ میلی مولار برابر با ۰/۱mg/l و GA3 با غلظت ۰/۲۹ میلی مولار برابر باmg/l 0/1 کشت دهید.
منبع: کتاب اصول بیوتکنولوژی گیاهی، انتشارات دانشگاه فردوسی مشهد، چاپ ششم.
دیدگاهتان را بنویسید